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TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)

更新日期:2023-12-14

訪(fǎng)問(wèn)量:2205

廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家

所在城市:上海市

簡(jiǎn)要描述:
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Alexa Fluor 488):
細胞凋亡時(shí),部分DNA內切酶會(huì )被激活,進(jìn)而切斷基因組DNA。TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 細胞凋亡檢測試劑盒可以用來(lái)檢測組織細胞在凋亡晚期過(guò)程中細胞核DNA的斷裂情況。
品牌其他品牌供貨周期現貨
應用領(lǐng)域醫療衛生,生物產(chǎn)業(yè)

其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時(shí)暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入被Alexa Fluor 488染料標志的dUTP,使凋亡的細胞被標志上綠色熒光,從而可以用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。

本試劑盒為直接熒光標志法的TUNEL染色,染色步驟簡(jiǎn)便,應用范圍廣泛,可用于檢測冰凍切片、石蠟切片和培養細胞的凋亡情況。
包裝清單:

產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱(chēng)包裝1包裝2
SJ1272TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Alexa Fluor 488)20T50T
說(shuō)明書(shū)一份



TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒產(chǎn)品組成:

編號

組分

20T

50T

試劑(A)

50× Proteinase K

20 ul

100 ul

試劑(B)

10 × DNase I Buffer

100 ul

500 ul

試劑(C)

DNase I

20 ul

100 ul

試劑(D)

Equilibration Buffer

2 ml

10 ml

試劑(E)

5×TdT Enzyme Buffer

200 ul

1 ml

試劑(F)

Recombinant TdT Enzyme

20 ul

100 ul

試劑(G)

Alexa Fluor 488-dUTP

20 ul

100 ul

試劑(H)

dATP

20 ul

100 ul

試劑(I)

封片劑(含DAPI)

1.5 ml

7.5 ml


保存條件:

-20 ℃保存,一年有效。

操作步驟:

1、樣本處理:

a) 石蠟切片:經(jīng)二甲笨、酒精脫蠟,復水。脫蠟應充分。

b) 冰凍切片:流水沖洗,去除OCT包埋膠后,用純水洗3次。

c) 細胞飛片:用組織固定液固定后,用PBS洗三次,每次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘,用PBS洗三次,每次5分鐘。

2、蛋白酶消化

將1ul 試劑(A)50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中,滴加到組織上,37℃孵育10-20分鐘。消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

3、陽(yáng)性對照組織的處理

將組織用DNase I消化,以獲得斷裂的DNA,即成Tunel染色陽(yáng)性的對照。陽(yáng)性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片。

純水

46 ul

試劑(B): 10 × DNase I Buffer

5 ul

試劑(C): DNase I

1 ul

共計

50 ul

將50 ul DNase I消化液滴加于組織上,37℃孵育10-30分鐘,消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

4、Tunel標志染色:

Tunel標志染色前用50 ul Equilibration Buffer孵育標本5-10分鐘。孵育過(guò)程中按下表配制Tunel染色工作液。去除標本上的Equilibration Buffer后,直接滴加50ul Tunel染色液,37℃孵育1-2小時(shí),染色結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

試劑(D)Equilibration   Buffer

37 ul

試劑(E)5×TdT Enzyme   Buffer

10 ul

試劑(F)Recombinant   TdT Enzyme

1 ul

試劑(G)Alexa Fluor   488-dUTP

1 ul

試劑(H)dATP

1 ul

共計

50 ul

5、封片:

每組織上滴加一滴封劑,小心蓋上蓋玻片,避免產(chǎn)生氣泡。用吸水紙吸去多余的封片劑。熒光顯微鏡下觀(guān)察。


注意事項:

1、Proteinase K 消化時(shí)間需要摸索,冰凍切片 10 min 左右,石蠟切片時(shí)間應適當延長(cháng)。

2、陰性對照體系:配制Tunel染色工作液時(shí)用純水替代TdT Enzyme。

3、懸浮細胞用離心的方法收集細胞,所有反應在離心管中進(jìn)行,染色結束后,可在熒光顯微下觀(guān)察,也可以用流式細胞儀檢測。

4、Tunel標志染色時(shí)應注意避光。

5、實(shí)驗過(guò)程中請穿戴手套、實(shí)驗服等,做好個(gè)人防護。




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