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TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法)

更新日期:2023-12-14

訪(fǎng)問(wèn)量:2212

廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家

所在城市:上海市

簡(jiǎn)要描述:
細胞凋亡時(shí),部分DNA內切酶會(huì )被激活,進(jìn)而切斷基因組DNA。TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 細胞凋亡檢測試劑盒可以用來(lái)檢測組織細胞在凋亡晚期過(guò)程中細胞核DNA的斷裂情況。
品牌其他品牌供貨周期現貨
應用領(lǐng)域醫療衛生,生物產(chǎn)業(yè)

其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時(shí)暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入生物素(Biotin)標志的dUTP,隨后通過(guò)Biotin與連接辣根過(guò)氧化酶的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)特異結合,在辣根過(guò)氧化酶底物二氨基聯(lián)苯胺(DAB)的存在下,產(chǎn)生深棕色的不溶物,從而特異準確地定位凋亡的細胞。

本試劑盒可用于石蠟切片、冰凍切片和細胞樣本(細胞涂片或爬片)的凋亡原位檢測,檢測結果可在普通光學(xué)顯微鏡下直接觀(guān)察計數。
包裝清單:

產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱(chēng)包裝1包裝2
SJ1271
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法)20T50T
說(shuō)明書(shū)一份



產(chǎn)品組成:

編號

組分

20T

50T

儲存條件

試劑(A)

50× Proteinase K

20 ul

100 ul

-20℃

試劑(B)

10 × DNase I Buffer

100 ul

500 ul

-20℃

試劑(C)

DNase I

20 ul

100 ul

-20℃

試劑(D)

Equilibration Buffer

2 ml

10 ml

-20℃

試劑(E)

5×TdT Enzyme Buffer

200 ul

1 ml

-20℃

試劑(F)

Recombinant TdT Enzyme

20 ul

100 ul

-20℃

試劑(G)

Biotin-11-dUTP

20 ul

100 ul

-20℃

試劑(H)

dATP

20 ul

100 ul

-20℃

試劑(I

Streptavidin-HRP

20 ul

100 ul

4℃

試劑(J

DAB-A solution

1 ml

5 ml

-20℃

試劑(K

DAB-B solution

50 ul

250 ul

-20℃


保存條件:

Streptavidin-HRP, 4℃, 其余試劑-20 ℃保存,一年有效。

操作步驟:

1、樣本處理:

a) 石蠟切片:經(jīng)二甲笨、酒精脫蠟,復水。脫蠟應充分。

b) 冰凍切片:流水沖洗,去除OCT包埋膠后,用純水洗3次。

c) 細胞飛片:用組織固定液固定后,用PBS洗三次,每次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘,用PBS洗三次,每次5分鐘。

2、蛋白酶消化

將1ul 試劑(A)50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中,滴加到組織上,37℃孵育10-20分鐘。消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

3、封閉

用3%的雙氧水(H2O2)室溫封閉10分鐘,封閉結束后用PBS洗三次,每次5分鐘。

4、陽(yáng)性對照組織的處理

將組織用DNase I消化,以獲得斷裂的DNA,即成Tunel染色陽(yáng)性的對照。陽(yáng)性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片。

純水

46 ul

試劑(B): 10 × DNase I Buffer

5 ul

試劑(C): DNase I

1 ul

共計

50 ul

50 ul DNase I消化液滴加于組織上,37℃孵育10-30分鐘,消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

5、連接:

連接反應前用50 ul Equilibration Buffer孵育標本5-10分鐘。孵育過(guò)程中按下表配制連接工作液。去除標本上的Equilibration Buffer后,直接滴加50ul 連接工作液,37℃孵育1-2小時(shí),染色結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

試劑(D)Equilibration   Buffer

37 ul

試劑(E)5×TdT Enzyme   Buffer

10 ul

試劑(F)Recombinant   TdT Enzyme

1 ul

試劑(G)Biotin-11-dUTP

1 ul

試劑(H)dATP

1 ul

共計

50 ul

6、標志

取1 ul 試劑(I)Streptavidin-HRP加入到50ul PBS 中,混勻后滴加至組織上,37℃避光孵育30分鐘,隨后用PBS洗三次,每次5分鐘。

7、顯色

取50 ul 試劑(J)DAB-A solution 與2.5 ul 試劑(K)DAB-B solution混勻后,滴加至組織上,室溫顯色反應30秒至5分鐘。顯色結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘

8、蘇木素復染

每組織上滴加數滴Mayer’s蘇木素染色液,染色1-5分鐘,隨后用自來(lái)水沖洗反藍,如蘇木素染色過(guò)深,可用1%鹽酸酒精溶液分化數秒,再次反藍;如蘇木素染色過(guò)淺,可用蘇木素再次染色,并延長(cháng)染色時(shí)間。

9、封片觀(guān)察

經(jīng)梯度酒精脫水,二甲苯透明后,滴加中性樹(shù)膠,加蓋玻片封片,光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察拍照。

注意事項:

1、Proteinase K 消化時(shí)間需要摸索,冰凍切片 10 min 左右,石蠟切片時(shí)間應適當延長(cháng)。

2、陰性對照體系:配制連接工作液時(shí)用純水替代TdT Enzyme。

3、連接與標志反應時(shí)應注意避光。

4、實(shí)驗過(guò)程中請穿戴手套、實(shí)驗服等,做好個(gè)人防護。

備注

         產(chǎn)品信息可能會(huì )有優(yōu)化升級,請以實(shí)際標簽信息為準。

本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。

為了您的安全和健康,請在實(shí)驗過(guò)程中做好防護工作。



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